PRÁCTICA 8

14/11/19
PRÁCTICA Nº 8: "TINCIÓN ÁCIDO-ALCOHOL RESISTENTE"
                              "TINCIÓN DE KINYOU"
OBJETIVO

• Determinar la ácido alcohol resistencia de las micobacterias en muestras clínicas.

MATERIAL NECESARIO

• Mechero Bunsen.
• Asa de platino de siembra.
• Cultivo de M.Phlei.
• Portaobjetos.
• Agua destilada o solución salina fisiológica.
• Pinzas para tubos de ensayo.
• Paralelas y cubeta de tinción.
• Colorantes: Kinyou y solución de Gabett.
• Frasco con agua destilada.
• Microscopio óptico y aceite de inmersión.

TÉCNICA
Es una tinción más rápida que la de Ziehl-Neelsen ya que no necesita calor.

1. Se realiza la extensión del microorganismo M.Phlei, para ello:
1. Se deposita una gota de agua destilada o solución salina fisiológica (SSF) sobre un portaobjetos.
2. Se flamea el asa de platino en la llama azul (oxigenada) del mechero Bunsen, la agitamos suavemente para enfriarla, tocamos los bordes internos de la placa de Petri donde se encuentra el cultivo de M.Phlei para asegurarnos de que esté fría y tocar brevemente sobre una colonia aislada. Cerrar la placa (posición invertida).
3. Homogeneizar el microorganismo con el agua destilada o SSF con el asa de siembra.
2.  Posteriormente se procede a la desecación: coger el porta con unas pinzas para tubos de ensayo y colocar el porta sobre cierta altura de la llama del mechero de forma que se seque la disolución, pero que no queme a la palma de la mano el portaobjetos.
3. Fijación: realizar 3 pases por la llama del mechero.
4. Depositar el porta sobre unas paralelas colocadas encima de una cubeta de tinción y echarle colorante de Kinyou durante 3 minutos. (Fucsina)
   
5. Lavar con agua destilada.
6. Cubrir el porta con solución de Gabett 1 minuto. (Azul de metileno).
7. Lavar con agua destilada.
8. Dejar secar a Tª ambiente.
   
9. Observar con el microscopio óptico a 100X empleando aceite de inmersión.

RESULTADO:
BAAR de color rojo y no BAAR de color azul.
Nota: No me ha dado tiempo a visualizar la preparación al microscopio, pero debería verse de la siguiente manera.