PRÁCTICA 2

26/09/19
PRÁCTICA 2: "PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO EN PLACAS Y TUBO"

 MATERIAL NECESARIO
  • Matraz Erlenmeyer de 250 ml
  • Matraz aforado de 250 ml
  • Agua destilada
  • Vidrio de reloj
  • Balanza electrónica
  • Espátula
  • 6 tubos de vidrio cortos y sus respectivos tapones de rosca
  • Gradilla
  •  Medio de cultivo: Agar nutritivo
  • Alcohol 70º
  • Embudo
  • "Pulga o pulguilla" (imán) y varilla recogeimanes
  • Papel Parafilm
  • Varilla agitadora
  • Guante de goma
  • Tubos de ensayo
  • Placa calefactora-agitadora
PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO Y PREPARACIÓN DE MEDIO LÍQUIDO EN TUBO (CALDO)
PROCEDIMIENTO
Antes de iniciar la práctica, hemos preparado todos los materiales necesarios que se requieren para realizarla. A continuación, hemos limpiado las letras que había rotuladas en los tubos de vidrio con alcohol 70º y papel. Una vez hecho esto, comenzamos la práctica:
  1. En primer lugar, hemos limpiado con un pincel el platillo de la balanza para obtener una pesada correcta (sin que interfieran posibles restos de otra pesada anterior). Posteriormente, hemos procedido a pesar 10 gramos de Agar nutritivo en la balanza electrónica con ayuda de un vidrio de reloj y una espátula, con la cual hemos añadido poco a poco el agar hasta llegar a la cantidad deseada.
  2. A continuación, hemos vertido 250 ml de agua destilada en un matraz aforado de 250 ml hasta enrasar; para ello, hemos utilizado un embudo.
  3. Echar un poco de agua destilada en el matraz Erlenmeyer (de 250 ml) con el embudo y añadir poco a poco el Agar nutritivo agitando circularmente y de forma suave el matraz y luego con una varilla agitadora. Después, verter el resto de agua destilada hasta enrasar y así completar hasta los 250 ml de la disolución.
  4. Depositar en el interior del matraz Erlenmeyer que contiene los 250 ml de la disolución (Agar + agua destilada), una "pulga o pulguilla" (imán).
  5. Tapar el matraz con papel Parafilm.
  6. Poner el matraz Erlenmeyer sobre la placa calefactora-agitadora y programar la velocidad a la que deseamos que gire (rpm) y la temperatura adecuada. El imán que anteriormente hemos introducido en el matraz Erlenmeyer, comenzará a agitar la disolución mientras que va aumentado la temperatura en el interior del matraz.

  7. Quitar el matraz Erlenmeyer de la placa calefactora-agitadora cuando empiece a hervir con ayuda de un guante de goma.
  8. Dejar que se enfríe un poco y quitar la pulguilla con la varilla recogeimanes.
  9. Poner agua destilada en un tubo de ensayo de manera que no supere más de un tercio de su volumen, para tener como referencia la cantidad que se debe echar en los tubos.
  10. Por último, verter el medio de cultivo disuelto del matraz Erlenmeyer a cada uno de los 6 tubos teniendo como referencia la cantidad de agua destilada que contiene el tubo de ensayo que hemos preparado anteriormente. Tapar los tubos de vidrio con los tapones de rosca.
  11. Rotular cada tubo con "AN G.4", lo cual significa "Agar Nutritivo, grupo 4".
  12. Meter en el "frigorífico limpio" los medios de Agar nutritivo disueltos contenidos en los cuatro matraces Erlenmeyer y las dos gradillas que llenamos con todos los tubos de los grupos hasta el próximo día de la práctica.
Causa-Error: A casi todos los grupos se nos ha quemado el medio de cultivo disuelto debido a que no habremos programado bien el tiempo ni la temperatura adecuados en la placa calefactora-agitadora, o a algunos debido a que no han disuelto completamente el agar en el agua destilada y al calentarse se han quemado esos grumos del agar con facilidad.

 03/10/19
PREPARACIÓN DE MEDIO SÓLIDO EN TUBO (SLANT)
MATERIAL NECESARIO
  • Los 4 matraces Erlenmeyer y los tubos con el medio de cultivo disuelto.
  • Gradillas
  • Autoclave, cesta y bolsas autoclavables
PROCEDIMIENTO
Al próximo día de la práctica, seguimos el siguiente procedimiento:
  1. Sacar del "frigorífico limpio" de microbiología, los 4 matraces Erlenmeyer con el medio de cultivo disuelto y las 2 gradillas llenas con todos los tubos de los grupos; los cuales contenían el medio de cultivo disuelto del día anterior.
  2. Aflojar los tapones de los tubos.
  3. Situar en la cesta del autoclave 2 bolsas autoclavables y en ellas depositar los 4 matraces Erlenmeyer y las 2 gradillas con los tubos.

  4. Autoclavar todo este material.

  5. Sacar del autoclave la cesta y dejar enfriar inclinados, ligeramente, los tubos para obtener el medio en "pico de flauta" o "slant".


04/10/19
PREPARACIÓN DE UN MEDIO SÓLIDO EN PLACA
MATERIAL NECESARIO
  • Autoclave, cesta de autoclave y bolsas estériles para ello
  • Medio de cultivo: Agar nutritivo disuelto en agua destilada
  • Matraces Erlenmeyer con sus medios de cultivo disueltos
  •  3 placas de Petri estériles por cada alumno de la clase
  • Mechero Bunsen y encendedor
  • Guante de goma
PROCEDIMIENTO
  1. Autoclavar el Agar nutritivo disuelto contenido en el matraz Erlenmeyer de cada grupo con ayuda de la cesta del autoclave y una doble bolsa.
  2. Mientras está en funcionamiento el autoclave, coger 3 placas de Petri estériles por persona y rotular en un lado "AN" (Agar nutritivo) con un rotulador permanente.
  3. Una vez autoclavado el matraz Erlenmeyer durante el tiempo y la Tª adecuados, encender un mechero Bunsen con un encendedor.
  4. Distribuir el medio de cultivo disuelto en las 3 placas de Petri estériles (cada alumno las suyas) en las proximidades del mechero Bunsen (unos 15 cm de diámetro como límite para que la zona de trabajo pueda considerarse estéril). Para ello, quitaremos el tapón que previamente tenía puesto el matraz Erlenmeyer y a continuación flamearemos bien la boca del matraz, sirviéndonos de un guante de goma, para evitar contaminaciones. Con la otra mano, levantar la tapa de una de las placas de Petri estériles, solamente lo necesario para permitir la entrada del cuello del matraz y poder vaciar el Agar (hasta la línea marcada en la placa), e inmediatamente volver a tapar la placa de Petri. Realizar movimientos circulares de forma suave sobre la placa de Petri para que el Agar se distribuya uniformemente. Volver a flamear la boca del matraz y taparlo nuevamente, ya que aún contiene medio de cultivo.
  5. Dejar que el medio solidifique e invertir la placa Petri.
  6. Guardar todas las placas de los alumnos de la clase en dos cajas y meterlas en el frigorífico limpio de microbiología.

 
 

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