PRÁCTICA 3

04/10/19
PRÁCTICA 3: "SIEMBRA -  AISLAMIENTO"
MATERIAL NECESARIO

• Mechero Bunsen y encendedor por grupo de alumnos (en mi caso, el grupo está compuesto por 3 personas)
• Asa e hilo de platino por persona
• Cultivos bacterianos o muestras: E. Coli, Enterobacter y Citobacter
• Medios de cultivo distribuidos en placas de Petri: EMB (medio específico para E.Coli: medio de color rojo)
• Gradilla
• 6 tubos de ensayo de nuestro grupo (el 4) que contienen el agar nutritivo disuelto en slant

SIEMBRA EN PLACA PARA AISLAMIENTO
PROCEDIMIENTO
Antes de iniciar la práctica, preparar todos los materiales necesarios. Una vez hecho esto, procedemos a su realización:

1. Cambiar el hilo de platino de las asas si están en malas condiciones (como en mi situación).
2. Encender el mechero Bunsen con un encendedor, de forma que la llama quede azul, a ser posible. 
   
   
   
   
3. Flamear el hilo y el asa de siembra y enfriarla en las proximidades del mechero. 
   
   
   
   
4. Abrir un poco la placa de Petri con la otra mano que contiene las colonias de E.Coli, dar unos golpecitos pequeños y suaves en un borde interior de la placa para asegurarnos de que el asa está fría y tocar cuidadosamente y brevemente sobre una colonia aislada de E.Coli.
   
   
   
   
5. Cerrar la placa de Petri que contiene las colonias de E.Coli y abrir la placa de Petri que contiene el medio de cultivo específico para este tipo de microorganismos.
   
6. Distribuir la muestra de E.Coli en un área pequeña de la superficie de la placa, mediante un movimiento en zig-zag, haciendo estrías muy juntas, pero sin hacer presión para no dañar el medio de cultivo. Nota: en el caso de la siguiente foto se está sembrando Enterobacter.
   
   
   
   
7. Flamear de nuevo el asa, esperar que se enfríe y después de rozar la siembra realizada previamente, extender de nuevo por la zona contigua de la placa haciendo lo mismo que anteriormente.
   
8. Una vez realizada la extensión de ese área, sembrar los microorganismos en dos zonas más de la placa de Petri realizando el mismo procedimiento que el anteriormente explicado, pero esta vez no hace falta flamear para cambiar de área. 
   
9. Finalmente, realizar en la última área libre de la placa, una especie de "firma" con el fin de descargar los microorganismos que quedan en el asa de siembra.
10. Cerrar la placa de Petri, invertirla, flamear el asa de siembra para guardarla y ponerle a la placa de Petri la fecha, iniciales del nombre y el tipo de microorganismo que hemos sembrado en ella (E.Coli) con un rotulador permanente y colocarla en un porta placas (en posición invertida) junto a las demás placas de cada alumno de la clase para meterlas todas a la vez en la estufa a la Tª adecuada, con el objetivo de incubarlas. Mediante esta técnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que contenga un elevado número de bacterias.

Nota: En mi grupo, Madeleine y yo hemos sembrado una placa cada una con E.Coli, y la otra compañera de grupo (Carmen), ha sembrado Enterobacter. Por lo que, en total hemos sembrado 3 placas: 2 de E.Coli y 1 de Enterobacter.

08/10/19
Causa-Error:
Hemos visualizado los resultados de las siembras en placa y en mi placa no ha crecido nada. Esto se debe a que seguramente habré matado a los microorganismos por no haber esperado lo suficiente a que se enfriase el asa de siembra después de su esterilización en el mechero Bunsen antes de la recogida de los microorganismos para sembrarlos en la placa.

SIEMBRA EN TUBO
PROCEDIMIENTO

1. Encender el mechero Bunsen con el encendedor.
2. Flamear el asa de siembra, enfriarla agitándola de forma suave en las proximidades del mechero para conservar la esterilización de la misma, abrir la placa de Petri que contiene los microorganismos (en este caso Citobacter), tocar un poco en un borde interior de la placa para asegurarnos de que el asa está fría y tocar con suavidad y brevemente sobre una colonia aislada de Citobacter.
   
3. Cerrar la placa de Petri que contiene los microorganismos, coger un tubo de la gradilla con el medio de cultivo disuelto en "slant", retirar el tapón del tubo (sin salirse de las proximidades del mechero) cogiéndolo con el dedo meñique de la mano derecha (con la misma que estamos sosteniendo el asa).
   
   
4. Flamear la boca del tubo.
   
5. Introducir el asa de siembra en el tubo hasta el fondo del mismo, y seguidamente ir deslizándola, con un movimiento de zig-zag, por la superficie del medio desde el fondo hasta la parte superior.
   
6. Flamear de nuevo la boca del tubo y cerrarlo con su correspondiente tapón de rosca.
7. Flamear el asa de siembra y ponerla en su sitio.

Nota 1.- Hemos sembrado 3 tubos: 2 tubos con Enterobacter y 1 con Citobacter.
Nota 2.- Conforme vayamos sembrando los tubos con microorganismos, es aconsejable ir poniéndolos en los huecos de detrás de la gradilla para organizarnos y saber en cuáles hemos sembrado y en cuáles no. Las asas de siembra de platino también deben colocarse desde el primer momento en la gradilla.